Выделение нейронов из нервных колец

Для исследования нейроглиальных взаимоотношений существенно иметь изолированные нейроны, сохранившие свое глиальное окружение. Достигнуть этого удалось путем уменьшения концентрации ферментов и времени их воздействия на ткань. От применения растворов, связывающих двухвалентные ионы (ЭДТА, версен, цитрат), пришлось отказаться, так как они очень быстро и необратимо повреждали клетки.

Поэтому для ускорения действия ферментов использовали раствор сахарозы (0,14 М), не содержащий ионов. Для разделения нейронов и выделения их вместе с глией было достаточно воздействия смесью 0,1%-ной гиалуронидазы и 0,05%-ного кристаллического трипсина на изотоническом растворе сахарозы в течение 25-30 мин. при 37° (Костенко, Вепринцев, 1972). Однако следует отметить, что, несмотря на сохранение электрической активности, нейроны, выделенные таким образом, имеют очень слабую чувствительность к медиаторам.

В дальнейшем для выделения нервных клеток вместе с глией разработали еще один метод. Нервное кольцо при 0° помещается на несколько минут в 0,25 М раствор сахарозы, а затем сразу же в 0,5%-ный трипсин на физиологическом растворе и выдерживается в нем 3-5 мин. После этого нервное кольцо переносится в каплю чистого физиологического раствора, и клетки выдавливаются из него мягким ударом стеклянного поршня. При этом выделяется лишь часть нейронов, но большинство крупных нейронов не повреждается и сохраняет свое глиальное окружение. Электрические параметры и чувствительность к медиаторам у таких нейронов хорошо сохраняются.

Описанными выше методами хорошо выделяются нейроны прудовика. Для нервной ткани виноградной улитки применяли только трипсин: 0,1%-ную концентрацию на физиологическом растворе, 10-12 час. при 0-4°, либо 0,25%-ную концентрацию, 40- 60 мин. при 18-20°. Перед трипсинизацией нервное кольцо разрезали бритвой на две части, чтобы облегчить доступ трипсина через мощную соединительнотканную оболочку.