Принцип конденсации

В методике Falck использована, как известно, способность биогенных моноаминов образовывать флуорофоры под действием различных реагентов. Оказалось, что наибольшей реакционной способностью обладают низкомолекулярные альдегиды - формальдегиды и глиоксиловая кислота.

Для них характерна хорошая избирательность.

В основе метода лежит принцип конденсации катехоламинов (адреналина, норадреналина, допамина и их ближайших предшественников) под действием различных реагентов в присутствии протеинов. Образующиеся при этом флуорофоры - 6,7-дигидрокси-3.4-дигидрооксиизо-хинолины - приобретают способность сильно флуоресцировать. Максимум возбуждения их (рН 6-10) отмечается при длине волны 410 нм, а максимальная эмиссия - при 480 нм (Falck, Owman, 1965; Jonsson,. 1971 и др.). В этих пределах спектра флуоресценция имеет голубоватый оттенок; однако при использовании сильного запирательного фильтра, поглощающего световые еолны ниже 490 нм, она имеет зеленый и желто-зеленый цвет (Ritzen, 1967).

Исследованиями установлено, что флуорофоры, образованные из порадреналина, имеют несколько иную структуру - 4,6,7-тригидроокси-3,4-дегидроизохинолин. В ней определяется лабильная гидроксильиая группа в четвертом положении. У флуорофора из допамина последняя отсутствует.

При взаимодействии формальдегида с адреналином образуется флуорофор-1Ч-метил-4,6,7-тригидрооксиизохинслин. Аминокислота дона при действии формальдегида образует флуорофор почти такого же строения - 3-карбоокси-6,7-дигидроокси-3-4-дигидроизохинолин. Во всяком случае его спектральные характеристики идентичны с таковыми флуорофора, образованного адреналином (Jonsson, 1971).